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熒光顯微鏡與普通顯微鏡的區(qū)別
更新時間:2023-08-18   點擊次數(shù):1726次
熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡不同,它不是通過普通光源的照明觀察標本,而是利用定波長的光(通常是紫外光、藍紫光)激發(fā)顯微鏡下標本內(nèi)的熒光物質(zhì),使之發(fā)射熒光,所以,熒光顯微鏡的光源所起的作用不是直接照明,而是作為種激發(fā)標本的內(nèi)熒光物質(zhì)的能源。我們之所以能觀察標本,不是由于光源的照明,而是標本內(nèi)熒光物質(zhì)吸收激發(fā)的光能后所呈現(xiàn)的熒光現(xiàn)象。由此可知,熒光顯微鏡的特點,主要是它的光源能供給大量特定波長范圍的激發(fā)光,使受檢標本內(nèi)的熒光物質(zhì)能獲得必要強度的激發(fā)光。同時,熒光顯微鏡必須具備相應(yīng)的濾光鏡系統(tǒng)。熒光顯微鏡是**熒光組織化學的基本工具。它是由超壓光源、濾片系統(tǒng)(包括激發(fā)和壓制濾板)、光學系統(tǒng)和攝影系統(tǒng)等主要部件組成,是利用定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光。 
1.激發(fā)熒光的方式:按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍紫光)兩種。UV激發(fā)法是用短于400nm的近紫外光進行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光,所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光,容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。 
2.BV激發(fā)法:是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發(fā)。該方法使用藍光照射標本,所以熒光觀察系統(tǒng)的截止濾光片必須使用可阻斷藍光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對于激發(fā)光的大吸收波長和熒光的大發(fā)光波長比較接近,所以BV激發(fā)法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍光作為激發(fā)光,所以熒光色素的吸收效率較,可得到較明亮的圖像。其缺點是500nm以下的熒光無法看到,而500nm以上的使整個圖像顯黃色。在熒光抗體法中,大多以熒光色素有的顏色來判斷其特異性,所以在討論微妙的特異性時,上述BV激發(fā)法的缺點往往影響大。


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